产品货号：
BTN81220
中文名称：
昆虫RNA柱式提取试剂盒
英文名称：
Insect RNA column Extraction Kit
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本试剂盒是专门用于从富含多糖、糖蛋白、粘蛋白的动物样品（尤其是昆虫样品）中提取总RNA的试剂。
保存：室温，昆虫RNA纯化溶液B最好放4℃长期保存，有效期一年。
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- 操作简单快速，处理一个样品只需要约十分钟。
- RNA纯度高，平均OD260/280一般都在2.0左右，能够有效去除大多数昆虫中的多糖污染。
- 适用于各种昆虫组织，每100mg组织能提取到20～30μg总RNA。
- 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA合成等实验。
- 一站式，提供RNase-free的样品收集管。
| 成分 | 规格 |
| 昆虫RNA纯化溶液A | 50mL |
| 昆虫RNA纯化溶液B | 15mL |
| 昆虫RNA纯化溶液C | 50mL |
| 离心吸附柱 | 50套 |
| 通用洗柱液 | 50mL |
| RNA洗脱液 | 10mL |
保存：室温，昆虫RNA纯化溶液B最好放4℃长期保存，有效期一年。
- 将50～300mg昆虫组织放入10～15mL塑料离心管中，加入1mL昆虫RNA纯化溶液A，然后用匀浆器匀浆5～20秒。匀浆时会产生泡沫，但不影响提取效果。也可以使用液氮砚磨法破碎昆虫组织，砚磨完后加入1mL昆虫RNA纯化溶液A。
注意：溶解昆虫RNA纯化溶液A沉淀。昆虫RNA纯化溶液A在4℃放置后可能会产生沉淀，使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。 - 将匀浆物或砚磨物转移至干净的1.5mL塑料离心管中（可以不必转移非液体的细胞碎片）。
- 在离心管中加入0.3mL的昆虫RNA纯化溶液B和0.2mL自备氯仿，在振荡器上振荡30秒混匀，此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
- 室温12,000rmp离心3～5分钟，两相间将有约5-10毫米厚的细胞破碎物。
- 将上清液（约0.6mL）转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中，下层有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。最好留下100μL上清液不取。
- 加入等体积的昆虫RNA纯化溶液C，充分颠倒混匀。
- 将一半的溶液转移到离心吸附柱中，12,000rmp室温离心半分钟，弃穿透液。
- 将剩下的一半溶液转移到同一离心吸附柱中，12,000rmp室温离心半分钟，弃穿透液。
- 加0.7mL通用洗柱液，室温12,000rmp离心半分钟，弃穿透液。
- 加0.3mL通用洗柱液，室温12,000rmp离心半分钟，弃穿透液。此步可以省略。
- 室温12,000rmp离心半分钟。此步十分重要，否则残留的乙醇会影响RNA的使用。
- 将离心吸附柱转移到RNase-free收集管中，加入50～100μL RNA洗脱液，室温放置1～2分钟。
- 12,000rmp室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
- RNA完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子（BioTechniques，28：414，2000）。
注意：大部分昆虫的28S RNA被切割成两个小的片段，彼此用氢键相连，所以在甲醛变性胶中，没有28S带出现（文献见：Eva C.Winnebeck，Craig D.Millar and Guy R.Warman，Why does insect RNA look degraded?Journal of Insect Science:Vol.10：1-7） - RNA产量产率测定：将5～10μL RNA溶于TE缓冲液中（pH7.5～8.2之间）检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度（1 OD260的RNA=40μg/mL），进而计算出RNA的产量（浓度X体积）和产率（RNA产量/组织用量）。
- RNA纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8～2.1之间（具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关），高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。
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